Práctica 18: Determinación cuantitativa de creatinina

Determinación cuantitativa de creatinina

Objetivo

El objetivo de esta práctica es determinar la concentración de creatinina en nuestra muestra problema

Fundamento

El ensayo de la creatinina esta basado en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio descrito por Jaffé. La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método. 

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra ensayada.

Significado clínico

La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina componente de los músculos y puede ser transformada en ATP fuente de energía para las células.

La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular. Varia poco y los niveles suelen ser muy estables. Se eliminan a través del riñón. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. 

Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio,

Materiales

• Cubetas de espectofotometría

• Tubos de hemólisis de 3 mL 

• Micropipetas automáticas

• Puntas de pipetas desechables

Muestra

• Suero

Reactivos

• R1, reactivo picríco
• R2, reactivo alcalanizante

• Calibrador creatinina

Aparataje

• Espectofotómetro

Procedimiento

- Preaparación de los reactivos

1. Para preparar el reactivo de trabajo (RT), mezclamos cantidades iguales de R1 y R2. En nuestro caso mezclamos 20 mL de R1 y 20 mL de R2. 

2. Repartimos el RT en varios tubos para distribuirlos por el laboratorio

- Técnica

1. Encendemos el espectofotómetro y lo programamos a 492 nm+

2. Pipeteamos en tres tubos distintos:

- Blanco: 1 mL de RT

- Patrón: 1 mL de RT

- Muestra: 1 mL de RT

3. Llevamos los tubos al espectofotómetro y también el calibrador y la muestra. A la hora de medir medimos primero el blanco, depués el patrón y por último la muestra.

Para el patrón, añadimos 100 microlitros del calibrador y medimos a los 30 segundos de añadirlo lo apuntamos, después apuntamos la medida 90 segundos después. 

Para la muestra, añadimos 100 microlitros de muestra y medimos a los 30 segundos de añadirla y apuntamos, después apuntamos la medida 90 segundos después.

Lectura y resultado

- Medidas a los 30 segundos:

Patrón: 0,007

Muestra: 0,132

- Medida a los 90 segundos:

Patrón: 0,040

Muestra: 0,183

- Cálculos:

(A2-A1 Muestra) / (A2-A1 Patrón) x 2 

(0,183 - 0,132) / ( 0,040 - 0,007) x 2= 3,09 mg/dL