Práctica 17: Determinación cuantitativa de colesterol HDL

Determinación cuantitativa de colesterol HDL

Objetivo

El objetivo de la práctica es determinar la concentración de colesterol HDL en nuestra muestra problema

Fundamento

Determinación directa de HDLc (colesterol de lipoproteínas de alta densidad) sin necesidad de pre-tratamiento o centrifugado de la muestra.

La intensidad de color formado es proporcional a la concentración de HDLc presente en la muestra ensayada.

Significado clínico

Las particulas de HDL son lipoproteínas de alta densidad que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo  hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hígado para su excreción, se les conoce como el colesterol o `lipoproteína buena, ya que niveles elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular. Un nivel bajo de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular y enfermedades de las arterias coronarias. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Materiales

• Cubetas de espectofotometría

• Tubos de hemólisis de 3 mL

• Tapones

• Micropipetas automáticas

• Puntas de pipetas desechables

Muestra

• Suero

Reactivos

• R1 

• R2
• Calibrador HDL

Aparataje

• Espectofotómetro

• Baño termostático

Procedimiento

- Preparación de los reactivos

1. Reconstituimos el contenido del calibrador de HDL con 1 mL de agua destilada
2. Tapamos y movemos suavemente

- Técnica

1. Encendemos el espectofotómetro y lo programamos a 570 nm, también encendemos el baño termostático y lo ponemos a 37ºC

2. En tres tubos distintos, blanco, patrón y muestra, añadimos:

- Blanco: 300 microlitros de R1

- Patrón: 300 microlitros de R1 y 3 microlitros de calibrador

- Muestra: 300 microlitros de R1 y 3 microlitros de muestra

3. Incubamos los tubos en el baño termostático a 37ºC durante 5 minutos

4. Leemos la primera vez el blanco, el patrón y la muestra

5. Después de la primera lectura, añadimos el R2:

- Blanco: 100  microlitros de R2

- Patrón: 100  microlitros de R2

- Muestra: 100  microlitros de R2

6. Incubamos los tubos en el baño termostático a 37ºC durante 5 minutos

7. Medimos por segunda vez el patrón y la muestra

Resultado y lectura

- Primera medida:

Blanco: 0,000 A

Patrón: 0,040 A

Muestra:0,300 A

- Segunda medida:

Patrón: 0,279 A

Muestra: 0,780 A

- Cálculos:

(A2-A1 Muestra) / (A2-A1 Patrón) x 33,2

(0,780-0,300) / (0,279- 0,040) x 33,2= 66,7 mg/dL HDL