Práctica 16: Determinación cuantitativa de ácido úrico (uricasa- POD)

Determinación cuantitativa de ácido úrico

Objetivo

El objetivo de esta práctica es calcular cuantos mg de ácido úrico hay en nuestra muestra problema

Fundamento

El ácido úrico es oxidado por la ureasa a alantoina y peróxido de hidrógeno (2H2O2) que en presencia de peroxidasa, 4-aminofenazona y 2-4 Diclorofenol Sulfanato forma un compuesto rosáceo. La intensidad de quinonaimina roja formada es proporcional a la concentración de ácido úrico presente en la muestra ensayada. 

Significado clínico 

El ácido úrico y sus sales son el producto final del metabolismo de las purinas. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. 

Niveles altos de ácido úrico son indicativos de patología renal y generalmente se asocia con la gota. 

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. 

Materiales

• Tubos de hemólisis de 3 mL

• Cubetas de espectofotometría

• Pipetas automáticas

• Puntas de pipetas desechables 

• Tapones

Muestra

• Orina (con un poco de infección)

Reactivos

• R1: Tampón 

• R2: Enzimas 

• Patrón de ácido úrico (CAL)

Aparataje

• Espectofotómetro

• Baño termostático

Procedimiento

1. Encendemos y programamos el espectofotómetro a 520 nm

2. Preparamos los reactivos, para el reactivo de trabajo (RT): 

- Disolvemos el víal de R2 en un frasco de R1

- Mezclamos 

3. Preparamos el blanco, el patrón y la muestra, en tres tubos distintos:

- Blanco: 1 mL de reactivo de trabajo

- Patrón: 1 mL de reactivo de trabajo + 25 microlitros de patón de ácido úrico

- Muestra: 1 mL de reactivo de trabajo + 25 microlitros de muestra de orina

4. Mezclamos e incubamos en el baño termostático durante 5 minutos a 37ºC

5. Leemos la absorbancia en el espectofotómetro. Primero metemos el blanco, después el patrón y por último la muestra

Lectura y resultado

Lectura del espectofotómetro:

- Blanco: 0,000 A

- Patrón: 0,214 A

- Muestra: 1,467 A

Calculamos la concentración de ácido úrico en la muestra:

(A) Muestra - (A) Blanco / (A) Patrón - (A) Blanco x 6 x vol (dL) = mg/24 h de ácido úrico

1,467 / 0,214 x 6 x 0,00025 = 0,010 mg/24 h

Como la orina era "patológica" los resultados entran dentro de la normalidad.