Práctica 4:Determinación cuantitativa de glucosa (trinder-GOD POD)
Determinación cuantitativa de glucosa (trinder- GOD-POD)
Objetivo
El objetivo de la práctica es conocer la técnica de glucosa oxidasa
Fundamento
La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. EL peróxido de hidrógeno (H2O2), producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de oxígeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa (POD).
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
Significado clínico
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células. La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por un déficit de insulina.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
Materiales
- Cubetas de espectofotometría de 1 cm de paso de luz
- Micropipetas automáticas
- Puntas de pipeta desechable
- Tubos de hemólisis de 3mL
Muestra
- Suero libre de hemólisis y LCR
Reactivos
- R1- Tampón tris pH 7,4
- R2- Enzimas glucosa oxidasa (GOD) y peroxidasa (POD)
- Glucosa CAL
Aparataje
- Espectofotómetro
- Baño termostático
Procedimiento
- Preparación del reactivo de trabajo (RT)
Para preparar el reactivo de trabajo debemos disolver el contenido de un vial de R2 (enzimas) en un frasco de R1 (tampón).
Después tapamos y mezclamos suavemente hasta disolver su contenido
- Preparación de la muestra, patrón y blanco
1. Para preparar el blanco, la muestra y el patrón
- Blanco: 1 mL de RT
- Patrón: 1 mL de RT y 10 microlitros de patrón (glucosa CAL)
- Muestra: 1 mL de RT y 10 microlitros de suero
2. Resuspendemos el contenido de los tubos donde se encuentran el blanco, patrón y muestra
3. Incubamos 10 minutos a 37ºC en el baño termostático
4. Preparamos las cubetas de espectofotometría
5. Medimos las absorbancias
Para preparar el reactivo de trabajo debemos disolver el contenido de un vial de R2 (enzimas) en un frasco de R1 (tampón).
Después tapamos y mezclamos suavemente hasta disolver su contenido
- Preparación de la muestra, patrón y blanco
1. Para preparar el blanco, la muestra y el patrón
- Blanco: 1 mL de RT
- Patrón: 1 mL de RT y 10 microlitros de patrón (glucosa CAL)
- Muestra: 1 mL de RT y 10 microlitros de suero
2. Resuspendemos el contenido de los tubos donde se encuentran el blanco, patrón y muestra
3. Incubamos 10 minutos a 37ºC en el baño termostático
4. Preparamos las cubetas de espectofotometría
5. Medimos las absorbancias
Resultados
Absorbancias:
Blanco: 0,000
Patrón:0,353
Muestra: 0,780
Cálculos
(A)muestra / (A)patrón * 100 (concentración del patrón) =
=0,780/0,353 * 100= 220,96 mg/dL
No entra en los valores de referencia, ya que no sabemos el tiempo que el suero ha estado conservado y ni si es un suero patológico
Absorbancias:
Blanco: 0,000
Patrón:0,353
Muestra: 0,780
Cálculos
(A)muestra / (A)patrón * 100 (concentración del patrón) =
=0,780/0,353 * 100= 220,96 mg/dL
No entra en los valores de referencia, ya que no sabemos el tiempo que el suero ha estado conservado y ni si es un suero patológico
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